رسالة ماجستير بعنوان ( كيفية إنتاج انزيم الليباز من الزائفة الزنجارية و تطبيقاته)

نوقشت رسالة الماجستير للطالبة (آيات احمد علي) من قسم هندسة الكيميائية الاحيائية /كلية الهندسة الخوارزمي /جامعة بغداد٠ في قاعة مناقشات الدراسات العليا المركزية في الكلية ٠ يوم الخميس الموافق ٢٠٢١/١١/٢٥وكانت اللجنة برئاسة(أ٠م٠د٠مالك مصطفئ محمد) التدريسي في كلية المستقبل الجامعة وعضوية كل من (أ٠م د٠أثير غالب محمد) التدريسي في كلية الهندسة جامعة بغداد و(م٠د٠محمد يعقوب) التدريسي في كلية الهندسة الخوارزمي وإشراف كل من (أ٠م٠د٠خالد وليد حميد) رئيس قسم الهندسة الكيميائية الاحيائية في كلية الهندسة الخوارزمي و(أ٠د٠محمد ابراهيم نادر) التدريسي في معهد الهندسة الوراثية ٠ جامعة بغداد ٠استمتعت اللجنة الطالبة ومناقشتها حسب المواضيع التي تناولتها الطالبة والتي كانت الخلاصة منها بأن

اجري العمل الحالي لتحضير الليباز باستخدام طريقة التخليق الحيوي من الزائفة الزنجارية على عينات مختلفة من التربة الملوثة بالزيوت البترولية التي تم الحصول عليها من أماكن مختلفة في مصفى الدورة و الحدائق العامة في بغداد. اعتمدت نتائج التشخيص الأولي والثانوي على الاختبارات المورفولوجية والثقافية والكيميائية الحيوية التي أظهرت أن 15 عزلة من أصل 40 عزلة تنتمي إلى عزلات الزائفة الزنجارية . ثم تم زراعته في وسط ملح معدني مع زيت الزيتون لفخص قدرته على انتاج انزيم الليباز.

تم اختبار الظروف الفيزيائية والكيميائية لإنتاج إنزيم الليباز ، حيث تم اختيار قيم مختلفة من الأس الهيدروجيني وجد ان الرقم الهيدروجيني الامثل كان 7. ثم تم اختبار درجة الحرارة بدرجات مختلفة تتراوح من (22 درجة مئوية إلى 42 درجة مئوية) وجد أفضل نمو عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. كما تم تغيير مصادر النيتروجين والكربون ؛ تم استخدام الببتون والتريبتون كمصادر للنيتروجين بنسب مختلفة (1٪ ، 3٪) ومقارنة بالوسط المحتوي على زيت الزيتون. تمت مقارنة استخدام الجلوكوز واللاكتوز (1٪ ، 3٪) كمصادر كربونية مع الوسط المحتوي على زيت الزيتون. أخيرًا ، تم اختبار فترة الحضانة المناسبة لفترات زمنية تراوحت (24-72 ساعة) ووجد أن أفضل فترة حضانة كانت 48 ساعة مع نشاط إنزيم 60 وحدة / مل. تمت عملية استخلاص الإنزيم عن طريق ترسيب البكتيريا في جهاز طرد مركزي.

تمت تصفية المستخلص المحتوي على الإنزيم الخام ، ثم تمت تنقية مستخلص الإنزيم الخام كتنقية أولية عن طريق الترسيب بكبريتات الأمونيوم بمعدل تشبع 80٪ ، وبعد ذلك تمت تنقيته باستخدام تقنية التبادل الأيوني والترشيح الهلامي لتحديد الإنزيم نشاط كل خطوة.

أظهرت نتائج تنقية الليباز من الزائفة الزنجارية أن النشاط النوعي عند الترسيب بكبريتات الأمونيوم بنسبة تشبع 80٪ كان 9.28 وحدة / ملجم وكان الناتج 65٪. أظهرت نتائج التنقية بغسيل الكلى أن النشاط النوعي النوعي بلغ 44.28 وحدة\ ملجم . بينما بلغ النشاط النوعي عند التنقية بأستخدام عمود التبادل الايوني 130.5 وحدة\ ملجم, و وصل النشاط النوعي الى 248.4 وحدة \ملجم عند التنقية باستخدام الترشيح الهلامي بينما كان العائد 47.7%.

تمت دراسة تأثير درجة الحرارة ودرجة الحموضة وأيونات المعادن والمثبطات على نشاط واستقرار إنزيم الليباز المنقى. وجد أن الرقم الهيدروجيني 7 يعطي أفضل نشاط إنزيمي ، بينما وصل استقرار الإنزيم عند الرقم الهيدروجيني 6 و الرقم الهيدروجيني 7. تمت دراسة تأثير درجات الحرارة على نشاط وثبات الانزيم المنقى. أظهرت النتائج أن أفضل درجة حرارة لنشاط الإنزيم كانت 35 درجة مئوية ، بينما تراوحت أفضل درجات الحرارة لاستقراره بين 25-40 درجة مئوية. تمت دراسة تأثير إضافة أيونات المعادن مثل (كلوريد البوتاسيوم, كلوريد الكالسيوم, كلوريد الزنك) على نشاط إنزيم الليباز ، حيث تمت إضافة نسب مختلفة ، ووجد أنه عند اضافة 1 ملي مولار لم يكن هناك تغير في نشاط كل من كلوريد البوتاسيوم و كلوريد الكالسيوم بينما انخفض عند المعادن الاخرى . أما بالنسبة لتركيز 5 ملي مولار فقد زاد النشاط المتبقي للإنزيم عند إضافة كلوريد الكالسيوم ليصل إلى 116٪ بينما انخفض عند إضافة كلوريد الزنك و كلوريد النحاس إلى 83٪ و 20٪ بينما لم يتأثر بإضافة كلوريد البوتاسيوم حافظت على نشاطها المتبقي. وبعد السماع والمناقشة تم التداول وقبول الرسالة واعلان الدرجة التي حصلت عليها الطالبة والتي كانت بدرجة ( امتياز)